一、背景及概述
近年來，抗生素在人和動物中的普遍使用甚至是濫用所帶來的弊端日益彰顯。長期使用抗生素會使人和動物腸道內(nèi)的正常菌群失調(diào)，影響機(jī)體免疫功能的形成，甚至因長期濫用抗生素產(chǎn)生了具有多重抗藥性的“超級細(xì)菌”。因此，尋找抗生素的替代品成為人類未來生存和發(fā)展的緊迫任務(wù)。益生菌可改善宿主微生態(tài)平衡，抑制病原菌生長，提高宿主免疫力和健康水平。羅伊氏乳桿菌是目前已報(bào)道的幾乎天然存在于所有脊椎動物和哺乳動物腸道內(nèi)的乳酸菌。羅伊氏乳桿菌對腸黏膜具有很強(qiáng)的黏附能力，可改善腸道菌群分布，拮抗有害菌定植，避免罹患腸道疾?。涣_伊氏乳桿菌能產(chǎn)生一種被稱為“羅伊氏菌素(Reuterin)”的非蛋白質(zhì)類廣譜抗菌物質(zhì)，能廣泛抑制革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、酵母、真菌和病原蟲等的生長。羅伊氏乳桿菌益生菌制劑可改善人體機(jī)能，提高免疫力從而促進(jìn)人體健康。我國衛(wèi)生部于2003年批準(zhǔn)了羅伊氏乳桿菌可作為人類保健品的微生物菌種，且該菌已是國際上公認(rèn)的新型益生乳酸菌，具有很高的理論研究和生產(chǎn)應(yīng)用價(jià)值。對羅伊氏乳桿菌的研究早在20世紀(jì)80年代就已開始，對其各種益生功能的研究至今仍在繼續(xù)，且新的研究成果層出不窮，使人們對羅伊氏乳桿菌的益生功能有了更全面的認(rèn)識。
二、黏附性
細(xì)菌黏附是一個(gè)非常復(fù)雜的細(xì)菌與宿主細(xì)胞相互作用的過程。細(xì)菌表面的黏附素與宿主細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合之后，細(xì)菌便能牢固地黏附于宿主細(xì)胞上，并在該局部組織定居，大量繁殖。而腸道菌群在宿主腸道中的定植就是通過細(xì)菌的黏附性來實(shí)現(xiàn)的。因此，益生菌能否黏附于宿主腸道黏膜細(xì)胞表面形成穩(wěn)定的優(yōu)勢菌群是發(fā)揮其眾多生理功能的必要前提，而不能黏附于腸道黏膜細(xì)胞的細(xì)菌只能是過路菌而無法充分發(fā)揮其生理功能。羅伊氏乳桿菌是人和動物胃腸道中天然存在的乳桿菌之一，可承受胃酸和膽汁的作用而到達(dá)小腸的上部并黏附于小腸壁。對該菌黏附及定植能力的研究表明，羅伊氏乳桿菌細(xì)胞外存在黏附素，使其對宿主的黏膜黏液以及腸黏膜上皮細(xì)胞均表現(xiàn)較強(qiáng)的黏附能力。黏附素為乳酸菌表面普遍存在的結(jié)構(gòu)成分，其主要成分多為分泌蛋白、糖蛋白、黏多糖類物質(zhì)等。
用Caco-2細(xì)胞進(jìn)行體外黏附模擬實(shí)驗(yàn)，證明羅伊氏乳桿菌104R存在一種表面蛋白MapA，其不僅參與黏膜黏液的黏附，而且同時(shí)參與腸上皮細(xì)胞的黏附。研究表明羅伊氏乳桿菌1063可以編碼一種358kDa的蛋白質(zhì)，這種蛋白質(zhì)可促進(jìn)羅伊氏乳桿菌與黏膜黏液的黏附，而不同株羅伊氏乳桿菌是否能編碼這種蛋白質(zhì)對于該菌株與黏膜黏液的粘附強(qiáng)弱具有非常重要的作用。羅伊氏乳桿菌在腸道中的定植具有普遍性，目前還沒有研究證明其定植位點(diǎn)具有特異的選擇性，即無論對腸黏膜黏液，還是腸上皮細(xì)胞等多部位的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)及體外實(shí)驗(yàn)的Caco-2細(xì)胞系都可以檢測到羅伊士乳桿菌的定植。研究表明羅伊氏乳桿菌也可黏附在人結(jié)腸的上皮細(xì)胞。選擇47株乳酸桿菌通過設(shè)定特定篩選條件：pH2.5，膽鹽濃度0.3%，對Caco-2細(xì)胞的黏附及是否抑制腸道致病菌而不抑制正常菌群等條件，從中篩選理想的益生菌。他們的研究結(jié)果顯示只有5株符合以上條件，其中三株可以在人體中很好地定植，這三株中就包括羅伊氏乳桿菌，而且羅伊氏乳桿菌是這三株中唯一既具有很強(qiáng)的抑制病原微生物的能力又不會對腸道中正常菌群造成抑制的乳酸桿菌。另外，某些羅伊氏乳桿菌不僅可以黏附定植于腸道中，而且其菌體還可以分泌胞外物質(zhì)抑制腸道致病菌的黏附定植。羅伊氏乳桿菌104R可以黏附于豬回腸的黏液層，而且還能分泌一種大小為1700kDa的胞外物質(zhì)抑制產(chǎn)腸毒素大腸桿菌K88的生長定植。
三、功效
1、羅伊氏乳桿菌不僅具備乳酸菌主要的有益功效，而且還具備產(chǎn)生廣譜抗菌物質(zhì)的特效。羅伊氏乳桿菌能合成并分泌羅伊氏菌素，是一種為非蛋白質(zhì)類廣譜抗菌物質(zhì)，可有效抑制有害菌的生長。我國衛(wèi)生部于2003年批準(zhǔn)了羅伊氏乳桿菌可作為保健食品益生菌種。該菌合成和分泌的羅伊氏菌素具廣譜抗菌特性，且對人和動物無害，在生物抑菌劑、抗感染治療劑、生物交聯(lián)劑、新型生物材料的前體等方面有著廣泛的潛在用途。既可應(yīng)用于食品、飼料、飲料等的防腐以提高產(chǎn)品貨架期，又可作為生物抑菌劑，用于不能高溫滅菌的食品牛奶、生物材料的滅菌；作為嬰兒食品添加劑，用于調(diào)節(jié)嬰兒腸道菌群分布；作為口香糖添加劑，用于殺死口腔病原菌以預(yù)防齲齒；作為抗感染治療劑，替代抗生素用于動物病原蟲引發(fā)疾病的治療。此外，3-羥基丙醛還可以作為消毒劑和生物組織的固定劑，對生物體的毒害更小。
2、羅伊氏乳桿菌的免疫功效；益生菌對人和動物均顯示出有效的益生功效，但其益生功效的具體機(jī)制尚未完全清楚。這些益生功效包括增強(qiáng)機(jī)體先天性和獲得性免疫，刺激機(jī)體免疫器官的成熟，激活免疫系統(tǒng)，增加抗炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，降低腸道的滲透性等。最近研究發(fā)現(xiàn)，多種人源羅伊氏乳桿菌，包括DSM17938、ATCCPTA4659、ATCCPTA5289和ATCCPTA6475等均可通過單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)來刺激免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)，進(jìn)而不同程度地減輕人類腸道炎癥。用因腹腔接種LP-BM5白血病毒而患免疫缺陷癥的C57BL小鼠作為實(shí)驗(yàn)對象，來檢測羅伊氏乳桿菌對小球隱孢子蟲的控制作用。接種LP-BM5病毒后，這些小鼠均會表現(xiàn)出淋巴結(jié)腫大，對小球隱孢子蟲易感的癥狀。而先飼喂羅伊氏乳桿菌(108cfu/d)10天后再用小球隱孢子蟲來感染小鼠，發(fā)現(xiàn)這些實(shí)驗(yàn)鼠的腸道上皮細(xì)胞均未感染小球隱孢子蟲，而未飼喂羅伊氏乳桿菌的小鼠，在受小球隱孢子蟲感染后的糞便中發(fā)現(xiàn)了小球隱孢子蟲的卵母細(xì)胞。研究結(jié)果表明，羅伊氏乳桿菌有助于保護(hù)免疫缺陷的個(gè)體免受這種原生動物疾病的感染。另一些體內(nèi)研究顯示CD4+T淋巴細(xì)胞和小鼠干擾素-γ在機(jī)體抵抗感染中起著至關(guān)重要的作用。在飼喂羅伊氏乳桿菌的雞回腸固有層中發(fā)現(xiàn)CD4+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量與對照組相比顯著增加，表明飼喂羅伊氏乳桿菌可能是通過提高淋巴細(xì)胞數(shù)量來促使機(jī)體抵抗感染的。羅伊氏乳桿菌對T細(xì)胞受體-α缺陷的小鼠同樣具有保護(hù)作用。T細(xì)胞受體-α缺陷小鼠感染了小球隱孢子蟲后，小鼠盲腸會出現(xiàn)炎性損傷，這種盲腸損傷主要是由炎癥細(xì)胞滲入固有層致使大量上皮細(xì)胞增生所致。先將羅伊氏乳桿菌飼喂此種免疫缺陷型小鼠，再利用小球隱孢子蟲感染，發(fā)現(xiàn)飼喂了羅伊氏乳桿菌的小鼠回腸和盲腸中的小球隱孢子蟲數(shù)量明顯少于對照組，且上皮細(xì)胞增生及盲腸發(fā)炎的現(xiàn)象明顯好轉(zhuǎn)。該研究表明，羅伊氏乳桿菌對維持免疫缺陷小鼠腸道黏膜的完整性，以及提高動物免疫力具有明顯的促進(jìn)作用。
四、應(yīng)用
1、羅伊氏乳桿菌對動物健康影響的研究
1）羅伊氏乳桿菌對鼠類腸炎的影響：目前常用化學(xué)藥劑對實(shí)驗(yàn)鼠進(jìn)行腸炎誘導(dǎo)，常使用的化學(xué)藥劑有乙酸或甲氨蝶呤等。建立一個(gè)由乙酸誘導(dǎo)大鼠患上潰瘍性大腸炎的實(shí)驗(yàn)動物模型。他們發(fā)現(xiàn)，在進(jìn)行乙酸飼喂后立即以5×107～7×107cfu的劑量飼喂大鼠腸道特異性羅伊氏乳桿菌，可阻止?jié)冃源竽c炎的炎癥發(fā)展。甲氨蝶呤(MTX)是一種應(yīng)用于人類的抗腫瘤化學(xué)藥物，也可作為治療類風(fēng)濕疾病的藥物。但該藥會引起細(xì)胞毒素對腸道黏膜的傷害，破壞胃腸道微生態(tài)平衡，引起嚴(yán)重的小腸結(jié)腸炎。向大鼠腹腔內(nèi)注射MTX可引起嚴(yán)重的非穿孔性小腸結(jié)腸炎，同時(shí)伴隨體重驟減、黏膜組織物減少及腸道屏障損傷等癥狀。實(shí)驗(yàn)證明羅伊氏乳桿菌有助于建立腸道微生態(tài)平衡，降低由細(xì)菌轉(zhuǎn)移引起的腸道通透性損傷，即有助于削弱由MTX誘導(dǎo)產(chǎn)生的大鼠小腸結(jié)腸炎。他們還發(fā)現(xiàn)添加羅伊氏乳桿菌或植物乳桿菌會顯著增加回腸結(jié)腸分泌的IgA水平，同時(shí)提高CD4+和CD8+的數(shù)量。
2）羅伊氏乳桿菌對禽類生長抑制(AGD)的影響：剛孵化的禽類常因感染細(xì)菌或受環(huán)境應(yīng)激易造成生長抑制甚至死亡，此種現(xiàn)象稱作禽類生長抑制現(xiàn)象(AGD)，已成為嚴(yán)重影響禽類養(yǎng)殖生產(chǎn)的病癥之一。證明同樣是經(jīng)低溫冷應(yīng)激的幼雛，經(jīng)羅伊氏乳桿菌液噴霧及飼喂羅伊氏乳桿菌(106cfu)處理的實(shí)驗(yàn)組均表現(xiàn)出較對照組更少的死亡數(shù)和平均體重的顯著增加。另外，幼雛也常因飼料配方中蛋白質(zhì)含量不足而引起生長抑制，飼料營養(yǎng)的不足是引起AGD另一主要原因。實(shí)驗(yàn)中用含有羅伊氏乳桿菌的預(yù)防劑進(jìn)行飼喂發(fā)現(xiàn)小雞的生長遲緩得到了非常顯著的改善。以上表明飼喂羅伊氏乳桿菌可顯著調(diào)節(jié)應(yīng)激誘導(dǎo)的及營養(yǎng)不足誘導(dǎo)的生長抑制。
3）羅伊氏乳桿菌對仔豬腹瀉的影響：仔豬較易發(fā)生由小球隱孢子蟲引起的腹瀉。將飼喂羅伊氏乳桿菌的仔豬組與不飼喂羅伊氏乳桿菌的對照組進(jìn)行比較，記錄發(fā)生腹瀉的起始時(shí)間及腹瀉的嚴(yán)重程度。結(jié)果表明添加羅伊氏乳桿菌的處理組發(fā)生腹瀉的仔豬數(shù)量明顯減少，且發(fā)生腹瀉的嚴(yán)重程度也有明顯減輕。證明羅伊氏乳桿菌劑對由小球隱孢子蟲引起的仔豬腹瀉有明顯的調(diào)節(jié)改善功效。
4）羅伊氏乳桿菌在畜禽商業(yè)化養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)中的效用：實(shí)驗(yàn)室中的實(shí)驗(yàn)已驗(yàn)證了羅伊氏乳桿菌的諸多益生效用，在此基礎(chǔ)上更需要明確其在商業(yè)化養(yǎng)殖環(huán)境下是否具有類似功效。在16個(gè)火雞養(yǎng)殖場中進(jìn)行了該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)涉及火雞總量為280000只。將每572只火雞隨機(jī)分成一組，在其孵化到生長42天的過程進(jìn)行體重記錄。結(jié)果表明，飼喂羅伊氏乳桿菌的有益功效在飼喂開始后的幾天內(nèi)就很快顯現(xiàn)出來。對照組火雞的平均體重為3.8lbs，而飼喂羅伊氏乳桿菌的處理組的平均體重為4.2lbs，處理組體重較對照組有9.5%的增長，即飼喂羅伊氏乳桿菌組表現(xiàn)出較對照組更好的生長勢頭。另外，分別對16個(gè)商業(yè)化養(yǎng)殖場各自的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)表明，用孵化后4個(gè)月大上市年齡期的火雞作實(shí)驗(yàn)對象的12個(gè)組的實(shí)驗(yàn)效果更為明顯，即通過飼喂羅伊氏乳桿菌使各個(gè)生產(chǎn)指標(biāo)，包括存活率、飼料轉(zhuǎn)化率、體重、A級質(zhì)量的禽類數(shù)量等都得到顯著改善。證明無論在實(shí)驗(yàn)室條件還是商業(yè)生產(chǎn)條件下，羅伊氏乳桿菌作為益生菌飼喂動物均可表現(xiàn)出一致的良好效用。
5）羅伊氏乳桿菌可替代抗生素促進(jìn)仔豬生長：相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明，用羅伊氏乳桿菌，以及添加優(yōu)質(zhì)調(diào)味料的飼料分別飼喂斷奶前后仔豬，按照飼喂方式的不同分為三組：第一組(n=44)為對照組，不加高銅、抗生素及羅伊氏乳桿菌；第二組(n=41)按照商業(yè)飼料配方飼喂，其配方中添加了高銅和抗生素；第三組(n=53)用添加了羅伊氏乳桿菌的飼料進(jìn)行飼喂，其添加劑量按每頭豬每天含108cfu羅伊氏乳桿菌計(jì)。測定仔豬斷奶前的出生重量和生長速率，以及測定斷奶后21天仔豬的生長速率和飼料轉(zhuǎn)化率。結(jié)果表明，在斷奶前的實(shí)驗(yàn)中，羅伊氏乳桿菌添加處理組及抗生素添加處理組的各數(shù)據(jù)指標(biāo)較對照組都未表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢；然而在斷奶后的實(shí)驗(yàn)中，飼喂羅伊氏乳桿菌組的生長速率有了明顯的提高，同時(shí)該組的豬表現(xiàn)得更潔凈更健康。而綜合評價(jià)整體促生長功效，則羅伊氏乳桿菌處理組和生素處理組的效果趨于一致，且都優(yōu)于對照組?？梢?，飼喂羅伊氏乳桿菌對促進(jìn)仔豬生長可與添加抗生素組達(dá)到一致水平，表明在某些動物養(yǎng)殖中添加羅伊氏乳桿菌的確可作為抗生素的替代品，而且是促進(jìn)畜禽生長的一種可選的新型生物促生長方式，從而削弱由于抗生素使用所致不同物種間病原菌對抗生素的耐藥性。
2、羅伊氏乳桿菌對人類健康影響的研究
腹瀉是兒童最常見的病癥。在急性腹瀉期，原有的正常腸道菌群包括乳酸桿菌、雙歧桿菌、擬桿菌等，發(fā)生快速的改變。多項(xiàng)研究表明，乳酸桿菌的共生會加速宿主腸道微生物群恢復(fù)其原有的良好狀態(tài)，從而調(diào)節(jié)急性腹瀉患者腸道內(nèi)的菌群穩(wěn)態(tài)。用從人母乳中分離的羅伊氏乳桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)對象是6～36月齡的患有急性腹瀉的兒童；其中75%的患兒腹瀉是由輪狀病毒引起。實(shí)驗(yàn)檢測了處理后水樣腹瀉的持續(xù)時(shí)間，羅伊氏乳桿菌組是1.7天，安慰劑組(Placebo)是2.9天；繼而統(tǒng)計(jì)了處理后第二天腹瀉未愈人數(shù)的比例，羅伊氏乳桿菌組為26%，安慰劑組為81%。從而證明羅伊氏乳桿菌對治療兒童輪狀病毒腹瀉有良好的治療效果。另外，另一個(gè)實(shí)驗(yàn)證明羅伊氏乳桿菌治療腹瀉的功效是劑量依賴型的。羅伊氏乳桿菌對緩解由腸道菌群失調(diào)所引起的兒童便秘也同樣具有良好的效果。兒童通過口服羅伊氏乳桿菌(DSM17938)可促進(jìn)腸道蠕動，從而明顯改善兒童慢性便秘的癥狀。通過實(shí)驗(yàn)證明羅伊氏乳桿菌對嬰兒疝氣具有顯著療效。其通過每天向嬰兒早餐中添加108cfu劑量的羅伊氏乳桿菌DSM17938，可大大改善嬰兒疝氣的癥狀。
